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蛋白A琼脂糖凝胶 or 蛋白G琼脂糖凝胶,如何选择

(时间:2017-01-05 13:25  来源:必拓网   作者:admin   点击:次)
目前,约70-80%的抗体纯化使用Protein A、Protein G 亲和层析。Protein A和Protein G 来自于不同微生物的蛋白质,对于IgG具有特异性的亲和作用,而对于其它杂蛋白没有或者只有很弱的结合,因此具有极强的选择性。市场上的Protein A、Protein G 亲和层析介质,其基质主要以琼脂糖凝胶为主。通常,仅凭Protein A、ProteinG琼脂糖凝胶纯化抗体就可达到90%的纯度,但Protein A 琼脂糖凝胶、Protein G 琼脂糖凝胶有何不同,抗体纯化时又该如何选择呢?

蛋白A琼脂糖凝胶亲和层析介质与抗体的结合


蛋白A是A型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的一种细胞壁蛋白,分子量42KDa,它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。

蛋白A 琼脂糖凝胶是指将蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖凝胶基质上,可以特异性的和样品中的抗体分子结合,而使其他杂蛋白流穿,具有极高的选择性,一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。1个蛋白A分子至少可以结合2个IgG。蛋白 A也可以结合另一些免疫球蛋白,如用于某些种属的IgA、IgM的纯化。

蛋白G 琼脂糖凝胶亲和层析介质与抗体的结合 

蛋白G是从G类链球菌(Streptococci)中分离出来的胞壁蛋白,分子量25kDa。蛋白G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物单抗和多抗IgG。相对于蛋白A,蛋白G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力,尤其是对于IgG的亚基,如人 IgG3,小鼠IgG1和鼠 IgG2a。与蛋白A不同,蛋白G不与狗IgG结合、不结合人IgM,IgD,或IgA。此外,蛋白G还可以和某些抗体的Fab 和F (ab’)2 段结合。

蛋白G 琼脂糖凝胶将蛋白G作为亲和配基被偶联到琼脂糖凝胶基质上,可以广泛、更强地结合更多类型的IgG, 多克隆IgG及人IgG,同时血清蛋白结合水平更低,纯度更高,配基脱落也相对更低。


附表:蛋白A和蛋白G的相对结合强度

物种 亚类 蛋白A结合 蛋白G结
lgA 可变
  lgD
  lgE
  lgG1 ++++ ++++
  lgG2 ++++ ++++
  lgG3 ++++
  lgG4 ++++ ++++
  lgM 可变
鸡蛋黄 lgY
  ++ ++++
  ++ +
山羊   ++
豚鼠 lgG1 ++++ ++
  lgG2 ++++ ++
仓鼠   + ++
  ++ ++++
考拉   +
骆驼   +
猴(恒河猴)   ++++ ++++
小鼠 lgG1 + ++++
  lgG2a ++++ ++++
  lgG2b +++ +++
  lgG3 ++ +++
  lgM 可变
  +++ +++
  ++++ +++
大鼠 lgG1 +
  lgG2a ++++
  lgG2b ++
  lgG3 + ++
绵羊   +/— ++
强结合:++++     中等结合:++     弱或不结合:—

必拓生物抗体亲和层析产品

一、亲和层析介质预装柱

耐碱Protein A琼脂糖凝胶4FF预装柱(纯化工作站用)
耐碱Protein A琼脂糖凝胶4FF预装柱(手动中压系统用)
Protein A琼脂糖凝胶4FF预装柱(纯化工作站用)
Protein A琼脂糖凝胶4FF预装柱(手动中压系统用)
Protein G琼脂糖凝胶4FF预装柱(纯化工作站用)
Protein G琼脂糖凝胶4FF预装柱(手动中压系统用)
镍离子琼脂糖凝胶4FF预装柱(纯化工作站用)
镍离子琼脂糖凝胶4FF预装柱(手动中压系统用)

二、亲和层析介质
Protein A琼脂糖凝胶4B
Protein A琼脂糖凝胶4FF
耐碱Protein A琼脂糖凝胶4FF
Protein G琼脂糖凝胶4B
Protein G琼脂糖凝胶4FF
镍离子琼脂糖凝胶4FF

三、配基及检测蛋白
Protein A
Protein G
Protein L
Protein A单结构域-EGFP
Protein A单结构域-AP


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